談談白細胞介素1α（IL-1α）ELISA試劑盒的操作步驟

　　白細胞介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒的操作步驟如下：
 

　　1、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
 

　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl(在使用前一小時內配制)，酶標板加上覆膜,37℃反應60分鐘。
 

　　3、溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
 

　　4、每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液)100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
 

　　5、溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
 

　　6、依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
 

　　7、依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
 

　　8、用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。